Pre svega, i EcoR1 i Xba1 ostavljaju 5' prepusta kada probavljaju DNK (kao i Nde1). U oba slučaja 3' kraj je uvučen zbog čega poliermaza može dodati baze. Drugo, sve polimeraze mogu dodati baze samo na kraj od 3', tako da će Klenow dodati 4 baze na povučeni 3' kraj oba mjesta da bi stvorio tupe krajeve.
Da li restrikcijski enzimi ostavljaju 5 fosfata?
Vektori i umetci digestirani restrikcijskim enzimima sadrže potrebne terminalne modifikacije (5' fosfat i 3' hidroksil), dok fragmenti stvoreni lančanom reakcijom polimeraze (PCR) možda ne.
Mogu li se tupi krajevi vezati?
Ligacija tupog kraja
Podvezivanje tupog kraja ne uključuje uparivanje baza isturenih krajeva, tako da bilo koji tupi kraj može biti podvezan za drugi tupi kraj. Tupi krajevi mogu biti generirani restrikcijskim enzimima kao što su SmaI i EcoRV.
Da li Taq polimeraza proizvodi tupe krajeve?
Da… Taq Polymerase dodaje A-prepuste ako zadržite završni korak proširenja na 72 dC na PCR-u. Uglavnom se koristi za TA kloniranje.
Zašto koristiti Klenow fragment u DNK sekvenciranju?
Klenow fragment je izuzetno koristan za zadatke zasnovane na istraživanju kao što su: Sinteza dvolančane DNK iz jednolančanih šablona . Popunjavanje uvučenih 3' krajeva DNK fragmenata kako bi se previs od 5' učinio tupim . Uklanjanje izbočenih 3' prepusta.
