Tripsinizacija je proces ćelijske disocijacije korištenjem tripsina, proteolitičkog enzima koji razgrađuje proteine, kako bi odvojio priljepljene stanice iz posude u kojoj se uzgajaju. Kada se doda u ćelijsku kulturu, tripsin razgrađuje proteine koji omogućavaju ćelijama da prianjaju na posudu.
Zašto tripsiniziramo ćelije?
Tripsinizacija se često radi da bi se omogućio prolaz ćelija u novi kontejner, posmatranje radi eksperimentisanja ili smanjenje stepena konfluencije u tikvicu uklanjanjem procenta ćelije.
Kako tripsin radi na odvajanju ćelija?
Tripsin/EDTA je kombinovana metoda za odvajanje ćelija. Tripsin reže adhezione proteine u interakcijama ćelija-ćelija i ćelija-matriks tako što seče aminokiseline adhezionih proteina posebno na lizinu ili agininu na C-terminalu ako uzvodna amino kiselina nije prolin.
Kako dobiti tripsinizirane adherentne ćelije?
Procedura
- Uklonite medijum iz posude za kulturu aspiracijom i operite monosloj rastvorom soli bez Ca2+ i Mg 2+ za uklanjanje svih tragova seruma. …
- Dozirajte dovoljno tripsina ili tripsina/EDTA rastvora u posude za kulturu da potpuno pokrijete monosloj ćelija i stavite u inkubator na 37 °C na ~2 minute.
Kako da onemogućim tripsin u kulturi ćelija?
Kada se ćelije pojave odvojene, dodajte 2 tomaprethodno zagrijane kompletne podloge za rast za inaktivacijutripsina. Nežno raspršite medijum pipetiranjem preko površine sloja ćelije nekoliko puta kako biste osigurali oporavak >95% ćelija. Za kulture bez seruma, inhibitor tripsina soje (Br. proizvoda
