Kada se ćelije pojave odvojene, dodajte 2 količine prethodno zagrijanog kompletnog medija za rast da deaktivirate tripsin. Nežno raspršite medijum pipetiranjem po površini ćelijskog sloja nekoliko puta kako biste osigurali oporavak >95% ćelija.
Kako da zaustavim aktivnost tripsina?
Probava tripsina se može zaustaviti zamrzavanje ili snižavanjem pH reakcije ispod pH 4 dodavanjem mravlje, octene ili trifluorosirćetne kiseline (tripsin će povratiti aktivnost kada pH je povišen iznad pH 4). Probavljeni uzorci mogu se čuvati na -20°C.
Šta neutrališe tripsin?
Pufer koji sadrži jone kalcijuma i magnezijuma takođe će usporiti aktivnost tripsina. FBS je međutim efikasniji način za inhibiciju aktivnosti tripsina.
Da li serum inaktivira tripsin?
Serum inaktivira rezidualni tripsin preostali od enzimske probave bubrega i proteolitičkih enzima koje sintetiziraju ćelije. Svježe tripsinizirane ćelije mogu se uzgajati u monoslojeve u odsustvu seruma pod uslovom da su više puta isprane kako bi se uklonio ostatak tripsina.
Koliko medija je potrebno da se deaktivira tripsin?
Sve dok koristite najmanje 1:1 odnos 5-10% seruma sa vašim tripsinom trebalo bi da postoji više nego dovoljna inhibicija, nakon čega slijedi centrifugiranje i srednja zamjena sa svježim medijem.