Također možete odsoliti svoj uzorak ultrafiltracijom do 1 desetine prethodne zapremine, koju ponovo razblažite i ponovite korak UF. Najbolja metoda za odsoljavanje je odsoljavanje gel filtracijom protiv 50 mM pufera, nego ultrafiltracija (klasična, ne centrifugalna).
Šta je odsoljavanje u prečišćavanju proteina?
Odslađivanje se koristi za uklanjanje soli iz proteinskih otopina, fenola ili neugrađenih nukleotida iz nukleinskih kiselina ili viška reagensa za umrežavanje ili označavanje iz konjugiranih proteina.
Kako pročišćavate proteine?
U masovnom prečišćavanju proteina, uobičajen prvi korak za izolaciju proteina je precipitacija sa amonijum sulfatom (NH4) 2SO4. Ovo se izvodi dodavanjem sve veće količine amonijum sulfata i prikupljanjem različitih frakcija precipitiranih proteina. Nakon toga, amonijum sulfat se može ukloniti dijalizom.
Kako vršite pufer razmjenu proteina?
Zamjena pufera se, međutim, izvodi prvim ekvilibriranjem sa smolom kolone sa puferom u kojem bi uzorak trebao završiti. U oba slučaja, puferski sastojci koji nose uzorak u kolona će biti zamijenjena otopinom s kojom je kolona prethodno ekvilibrirana.
Koja od sljedećih tehnika hromatografije se može primijeniti za odsoljavanje proteina?
Kao što je gore spomenuto, gel filtracija se može efikasno iskoristiti za proteineodsoljavanje i postiže se prvo ravnotežom kolone za gel filtraciju vodom. Međutim, razmjena pufera se postiže prvo ravnotežom smole kolone sa ciljnim puferom.
